专利号:(ZL202311272433.8)
专利简介:鸡细小病毒 (Chicken parvovirus, ChPV)属于细小病毒属(Aveparvovirus),ChPV是引起鸡发育迟缓综合征(runting-stunting syndrome, RSS)的主要病原体之一,又被称为吸收不良综合征(malabsorption syndrome, MAS),主要导致雏鸡的腹泻、发育迟缓和死亡率上升。由于目前缺乏ChPV商品化疫苗,ChPV的感染对养鸡业造成重大的或潜在的经济损失,急需要建立ChPV快速筛查和相关安全防治措施。
ChPV基因组大小约5 kb左右,含有三个开放阅读框(ORF),分别编码4种蛋白。VP2蛋白由537个氨基酸组成,是ChPV最主要的衣壳蛋白。VP2蛋白是病毒的主要保护性抗原,具有较强的免疫原性,机体受到该蛋白刺激会产生强烈的免疫应答,猪细小病毒和犬细小病毒的VP2蛋白等常被用于血清学诊断和疫苗制备。由于ChPV复制方式上具有独特性,在鸡胚和细胞中难以正常增殖,进一步加大了该病毒免疫诊断的难度,因此目前多采用分子生物学方法检测,包括PCR、巢式PCR和染料法定量PCR检测等相关核酸检测方法,但是核酸提取和PCR要求有特殊仪器,并且对检测人员要求较高,不适合现场快速检测。目前还缺少对ChPV抗原等的血清学检测方法,同时对ChPV的VP2蛋白与宿主细胞相互作用的功能性研究还相对不足,其主要原因多在于缺少VP2蛋白的特异性抗体检测工具。
本发明提供了一种鸡细小病毒VP2单克隆抗体及其应用,涉及到生物技术和病毒学领域,本发明筛选得到的1株鸡细小病毒VP2蛋白单抗,能够特异性结合鸡细小病毒和体外表达的VP2蛋白,且1株单抗的轻链为kappa链,重链为IgG2a。由单抗3F8为包被抗体建立了ChPV VP2蛋白的双抗体夹心ELISA检测平台,对鸡细小病毒的最低检测线达15.6 ng/mL,特异性强、灵敏度高、稳定性好,并与巢式PCR共同对192份临床样品的平行检测显示总符合率达到81.3%。本发明提供的鸡细小病毒的单抗不仅可以用于制备鸡细小病毒相关的检测试剂,还可以为鸡细小病毒VP2蛋白的功能等基础研究提供了原料,有助于养鸡业中对鸡细小病毒的防控工作,也有助于对鸡细小病毒相关蛋白的基础研究。
