专利号:ZL202311271713.7
专利简介:鸡细小病毒 (Chicken parvovirus, ChPV)属于细小病毒属(Aveparvovirus),ChPV是引起鸡发育迟缓综合征(runting-stunting syndrome, RSS)的主要病原体之一,又被称为吸收不良综合征(malabsorption syndrome, MAS),主要导致雏鸡的腹泻、发育迟缓和死亡率上升。ChPV的感染可能会对养鸡业造成潜在的经济损失,急需要建立ChPV快速筛查和相关安全防治措施。
NS1蛋白是ChPV复制过程中的一种多功能蛋白,被发现与病毒DNA的复制、诱导宿主细胞凋亡、诱导炎症反应和基因转录调控等功能相关,然而,关于ChPV的NS1蛋白功能研究非常有限,能确定的是NS1是ChPV中最重要的非结构蛋白,主要定位于细胞核内,是一种核磷蛋白,NS1蛋白是病毒DNA复制和包装所必需的蛋白,由694个氨基酸组成,其序列高度保守。由于ChPV复制方式上具有独特性,在鸡胚和细胞中难以正常增殖,进一步加大该病毒免疫诊断的难度,因此目前多采用分子生物学方法检测,包括PCR、巢式PCR和染料法定量PCR检测等相关核酸检测方法,但是核酸提取和PCR要求有特殊仪器,并且对检测人员要求较高,不适合现场快速检测。目前还缺少对ChPV抗原等的血清学检测方法,同时对ChPV的NS1蛋白等与宿主细胞相互作用的功能性研究还相对不足,其主要原因多在于缺少对NS1蛋白等特异性抗体检测工具。
本发明提供了一种鸡细小病毒的单克隆抗体及其应用,涉及到生物技术和病毒学领域,本发明筛选得到的2株鸡细小病毒NS1蛋白单抗,能够特异性结合鸡细小病毒和体外表达的NS1蛋白,且2株单抗的轻链均为kappa链,重链均为IgG1。由单抗1B12为包被抗体建立了ChPV NS1蛋白的双抗体夹心ELISA检测平台,对鸡细小病毒的最低检测线达31.2 ng/mL,特异性强、灵敏度高、稳定性好,并与巢式PCR共同对192份临床样品的平行检测显示总符合率达到89.1%。本发明提供的鸡细小病毒的单抗不仅可以用于制备鸡细小病毒相关的检测试剂,还可以为鸡细小病毒NS1蛋白的功能等基础研究提供了原料,有助于养鸡业中对鸡细小病毒的防控工作,也有助于对鸡细小病毒相关蛋白的基础研究。
